Metode Penelitian Imunositokimia
Imunositokimia adalah metode yang dipakai untuk mendeteksi adanya lisan suatu protein spesifik atau antigen dalam sel dengan memakai antibodi spesifik. Antibodi spesifik tersebut akan berikatan dengan protein atau antigen.
Ada dua jenis metode imunositokimia yaitu metode pribadi dan metode tidak langsung. Pada metode langsung, antibodi yang mengikat fluoresen atau zat warna pribadi berikatan dengan antigen pada sel. Sedangkan pada metode tidak langsung, antigen diikatkan pada antibodi primer secara langsung, kemudian ditambahkan antibodi sekunder yang mengikat enzim menyerupai peroksidase, alkali fosfatase, atau glukosa oksidase. Antibodi sekunder akan berikatan dengan antibodi primer. Selanjutnya ditambahkan substrat kromogen yang akan diubah oleh enzim sehingga terjadi pembentukan warna (pigmen) yang akan mewarnai sel. Untuk menjamin antibodi biar sanggup mengikat antigen, sel harus difiksasi dengan ditempelkan pada materi pendukung padat sehingga antigen akan immobile. Hal ini sanggup dilakukan dengan cara menumbuhkan sel pada slide mikroskop, coverslip, atau materi pendukung plastik yang sesuai.
Ada dua macam metode fiksasi yaitu pelarut organik dan reagen cross-linking. Pelarut organik menyerupai alkohol dan aseton akan memindahkan lipid, mendehidrasi sel, dan mengendapkan protein. Reagen cross-linking menyerupai paraformaldehid membentuk jembatan intermolekuler melalui gugus amino bebas. Imunositokimia melibatkan inkubasi sel dengan antibodi. Antibodi akan berikatan dengan antigen atau protein spesifik di dalam sel. Antibodi yang tidak berikatan dipisahkan dengan pencucian, sedangkan antibodi yang berikatan dideteksi secara pribadi dengan antibodi primer berlabel, maupun secara tidak pribadi dengan antibodi sekuder berlabel enzim atau fluoresen.
Hasil Data
Ekspresi protein tertentu akan ditunjukkan dengan warna coklat pada sitoplasma (bukan inti sel). Warna biru pada sitoplasma menawarkan tidak adanya lisan pada sel atau level lisan yang rendah sehingga tidak terdeteksi.
0 Response to "Metode Penelitian Imunositokimia"
Posting Komentar